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产品简介
RIPA的全称是Radio Immunoprecipitation Assay,该裂解液得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。该裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。该裂解液的主要成分为50mM Tris (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS,以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。该裂解液裂解得到的蛋白样品需检测浓度时,可以用BCA法测定,不宜选用Bradford法测定,因该裂解液含有较高浓度的去垢剂。
包装清单
 
产品编号
 
 
产品名称
 
 
包装
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
W001
 
 
RIPA裂解液()
 
100ml
 
 
 
 
说明书
 
 
1
 
 
 
保存条件
-20保存,一年有效。
注意事项
1.为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以进行适当分装冻存。
2.需自备PMSF。PMSF(W004)也可以向本公司订购。
3.裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明
对于培养细胞样品
1.融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF(加入PMSF后要在30Min内用完,不然会失效),使PMSF的最终浓度为1mM
2.对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。加入适量裂解液,试剂使用量请参考附表1,在冰上用枪头吹打贴壁细胞,使裂解液与细胞充分接触,轻轻摇匀。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2 秒后,细胞就会被裂解。
1 贴壁细胞哺乳动物蛋白裂解液使用量推荐表
细胞培养板类型或培养面积
RIPA 裂解液使用量
 
 
100 mm*
500-1,000 µl
60 mm
250-500 µl
6 孔培养板
200-400 µl /
24 孔培养板
100-200 µl /
96 孔培养板
50-100 µl /
 
 
   对于100 mm培养板培养的107个细胞 (50 mg)可裂解获得约3 mg总蛋白细胞类型不同略有差异
 
3.对于悬浮细胞:2,500×g离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。每5×106细胞加入约200-500 µl裂解液,吹打均匀。
4.充分裂解后,10000-14000g离心3-5min,取上清,即可进行后续的PAGEWestern和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150µl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200µl250µl
对于组织样品
1.把组织剪切成细小的碎片。
2.融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM
3.按照每20mg组织加入150-250µl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4.玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5.充分裂解后,10000-14000g离心3-5min,取上清,即可进行后续的PAGEWestern和免疫沉淀等操作。
如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。
附:各种RIPA裂解液主要特点、差异和选择
产品编号
W001
W002
W003
产品名称
RIPA裂解液()
RIPA裂解液()
RIPA裂解液()
有效裂解成分
1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS
1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS
1% NP-40, 0.25% deoxycholate
裂解强度
温和
对膜蛋白的提取
很好
较好
一般
对胞浆蛋白的提取
很好
很好
很好
对核蛋白的提取
很好
较好
较好
胞浆磷酸化蛋白提取
很好
很好
很好
细胞核转录因子提取
很好
很好
很好
含蛋白酶抑制剂
含磷酸酯酶抑制剂
主要用途
WB, IP
WB, IP
WB, IP, co-IP
 
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